Extracción de ADN

OBJETIVOS:

1. Utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN de un producto natural
2. Observar la estructura fibrilar del ADN.

MATERIAL

Tubos de ensayo, un cuchillo, palitos de pinchos, una batidora. Papel de filtro o filtro de café. Cebolla grande fresca, agua destilada. Detergente lavavajillas, sal, zumo de piña o de papaya, alcohol de 96º muy frío.

Realización de la práctica.

1. Cortamos la zona central de la cebolla en dados
2. En un vaso de agua echamos 3 cucharaditas de detergente lavavajillas y una de sal y añadimos agua destilada hasta llenar el vaso.
3. Mezclamos esta solución con los trozos de cebolla
4. Licúamos el conjunto, con la batidora, a velocidad máxima durante 30 segundos
5. Filtramos el líquido obtenido con un filtro de café.
6. Llenamos un cuarto de un tubo de ensayo con la disolución filtrada.
7. Añade otro tanto de zumo de piña y mezclamos bien.
8. Añadimos un volumen de alcohol muy frío equivalente al del filtrado, cuidadosamente, haciéndolo resbalar por las paredes del vaso para que forme una capa sobre el filtrado.
9. Dejamos reposar durante 2 ó 3 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las dos capas. A continuación introducimos la varilla y movemos adelante y atrás.
10. Extraemos una maraña de fibras blancas de ADN.

PRECAUCIÓN:Cuando añadas el alcohol frío debes hacerlo de forma que resbale por las paredes del tubo para que forme una capa sobre el filtrado. Puedes utilizar la varilla de vidrio o una cucharilla para ayudarte.También puedes hacerlo con una pipeta Pasteur.

Fundamento de la práctica.

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que  romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. La solución de lavavajillas y sal ayudada por la acción de la licuadora es capaz de romper la pared celular y las membranas plasmática y nuclear.Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la  papaína, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN. El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.